大鼠直腸上皮細(xì)胞操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于。

U266B1 [U266], 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞

Hep G2, 人肝癌細(xì)胞系

PC-12(高分化)，PC12，大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤分化細(xì)胞株(高分化)

GH3, 大鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤

Hepa 1-6, 小鼠肝癌細(xì)胞

QBC-939, 人膽管癌細(xì)胞

B16-F10, 小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移細(xì)胞

SGC-7901, 人胃腺癌細(xì)胞系

SK-N-SH, 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

SK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細(xì)胞

A549, 人肺癌細(xì)胞系

A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細(xì)胞株

A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細(xì)胞株

SP2/0, 小鼠骨髓瘤細(xì)胞

WM35, 人黑色素瘤細(xì)胞

BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細(xì)胞株

U-2 OS, 人骨肉瘤細(xì)胞

WM451, 人黑色素瘤細(xì)胞

SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細(xì)胞

C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞

UM-UC-3, 人膀胱移行細(xì)胞癌

Hela, 人宮頸癌細(xì)胞系